石景山区代孕机构,抗精子抗体怎么检查啊
来源:http://beijingdaiyungongsi.net  日期:2020-04-04
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北京合法代孕,一个新生儿一段助孕缘。

石景山区代孕机构,抗精子抗体怎么检查啊

抗精子抗体是指男性或者女性,对男性精液有抵抗作用,使精子无法正常和卵子结合,导致不孕不育的发生。

抗精子抗体是一个复杂的病理产物,男女均可罹患,其确切原因尚未完全明了。

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那么,抗精子抗体怎么检查啊?1、酶联免疫吸附试验(1)精子抗原制备:筛选收集精液常规检查正常的精液,用生理盐水反复离心洗涤,尽可能除去精浆,经超声波超声粉碎,10~ 15min 高速离心,吸上清,测定上清液蛋白浓度,将蛋白浓度稀释为 3.5~ 5.0μg/mL,为精子抗原溶液。

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(2)反应板包被抗原:将人精子抗原稀释成 3.5~ 5μg/mL,包被液加到聚氯乙烯微量测定板内,每孔 100μL,置 4℃ 冰箱过夜。

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(3)封闭处理:次日早晨,倾去抗原溶液,用洗涤 PBS洗 3次,每次 5min,每次洗涤后都要将板在纸上拍干,再加入 1% 的聚乙烯醇溶液 200μL封闭,置室温 1h后同上法洗涤。

(4)加待测样品:样品用 PBS稀释 100倍,每孔加入 100μL,同时加 As-Ab血清及正常处女血清作分别阳性和阴性对照,置 37℃ 温育 1h,同上法洗涤。

(5)加酶结合物:HRP-Protein A 以 1∶640稀释,每孔加入 100μL,置室温 1h,同上洗涤。

(6)酶反应:加新鲜配制的 OPD 底物溶液,每孔加入 50μL,置室温暗处 10min,再加10% H2SO4终止液每孔 50μL。

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(7)结果判定:用酶标测定仪 490μm测其 OD 值,OD 值≥2.0时为阳性。

2、生物素-亲和素酶联免疫吸附试验(1)在 40孔微量测定板中加入 2~ 6μg/mL人精子膜抗原包被液,每孔 100μL,4℃ 过夜。

加 1% 聚乙烯醇封板 37℃ 、30min,用洗液洗 3次。

(2)待检血清 1∶1000稀释(宫颈黏液 1∶100)每孔 100μL,37℃ 温育 60min,同上洗涤。

(3)1∶100生物素化羊抗人 IgG,IgA 或 IgM,每孔 100μL,37℃ 、60min,同上洗涤。

(4)1∶100酶标亲和素,每孔 100μL,22℃ 温育 30min,同上洗涤。

(5)每孔加底物 100μL,37℃ 作用 5~ 10min,加 8mol/L H2SO450μL 终止反应。

(6)用酶标检测仪测 A490光密度(OD)值,为双份待测孔均值与双份阴性孔均值之差,血清取 OD 值 0.20(宫颈黏液取 0.10)作为 AsAb阳性的判断标准。

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